GEFERSON GONÇALVES

Título da Tese: Extratos hidroalcoólicos de bagaço de uva Merlot e compostos hidrossolúveis de alecrim melhoram os estados oxidativo e inflamatório de ratos com artrite induzida por adjuvante

Orientadora: Profª. Drª. Rosane Marina Peralta

 Data da Defesa: 17/11/2017

RESUMO GERAL

INTRODUÇÃO E OBJETIVOS - A artrite reumatóide (AR) é uma doença autoimune caracterizada por inflamação crônica das articulações (membrana sinovial) e posterior destruição da cartilagem e do osso. A doença envolve eventos imunológicos bem conhecidos, como a participação de células T, células B, macrófagos e citocinas pró-inflamatórias. A progressão da doença também é acompanhada por um aumento do estresse oxidativo nos locais da lesão. Houve uma busca sistemática de produtos naturais capazes de atenuar os efeitos deletérios da artrite e outras doenças inflamatórias. Com este propósito, são investigadas várias preparações ricas em flavonóides antioxidantes ou flavonóides purificados. Nesta tese, utilizamos extratos hidroalcoólicos de bagaço de uva e extratos aquosos de alecrim. Os resultados obtidos nos últimos procedimentos devem ser úteis na identificação dos princípios ativos mais prováveis. Tendo em conta a natureza inflamatória da artrite e as modificações do estado oxidativo induzidas pela doença, a questão que pode ser formulada é uma sobre uma possível ação benéfica do extrato aquoso dealecrime do extrato hidroalcoólico de bagaço de uva no estado oxidativo e nas lesões inflamatórias causadas pela artrite. MÉTODOS – Para realização do primeiro trabalho foram obtidas amostras de bagaço de uva (Vitis vinífera) da variedade Merlot de empresas localizadas no Estado do Paraná, no Brasil. As amostras foram subprodutos do processo de vinificação, obtidas depois que as uvas foram pressionadas. A amostra de bagaço de uva Merlot foi seca, moída e armazenada a -20 °C até a utilização. O perfil fenólico foi determinado nos extratos liofilizados e redissolvido em uma mistura de etanol: água (40:60, v/v), por LC-DAD-ESI/MSn (Dionex Ultimate 3000 UPLC, Hermo Scientific, San Jose, CA , EUA). Ratos Holtzman machos foram alimentados ad libitum com uma dieta de laboratório padrão e mantidos em um ciclo de luz clara regulada. Para a indução de artrite, os animais com 180-210 g foram injetados na pata traseira esquerda com 0,1 mL de adjuvante completo de Freund. Ratos de pesos semelhantes foram injetados com óleo mineral e serviram como controles. O trabalho foi previamente aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da Universidade de Maringá (Protocolo nº 8119260115-CEUA-UEM). Para avaliar os efeitos do extrato de bagaço de uva sobre o estado oxidativo de ratos artríticos, os animais foram divididos em 4 grupos de 6 ratos cada. O tratamento dos ratos artríticos consistiu na administração do extrato de bagaço de uva (250 mg/kg de peso corporal) durante 5 dias antes da indução de artrite e durante 18 dias adicionais a indução. Para avaliar a atividade antiinflamatória dos extratos de bagaço de uva, os ratos foram divididos em 4 grupos de 6 animais cada. O tratamento dos ratos artríticos consistiu na administração de ibuprofeno ou extrato de bagaço de uva. Após 18 horas de jejum, os ratos foram decapitados, o cérebro eo fígado foram imediatamente removidos, congelados e armazenados em nitrogênio líquido. Os ratos foram anestesiados e o sangue foi coletado e transferindo-o para tubos contendo anticoagulante. Também foi realizada a determinação do número de leucócitos recrutados na cavidade da articulação femoro-tibial, edema da pata e pontuação das lesões artríticas. O homogeneizado do cérebro e do fígado eo plasma foram testados quanto a parâmetros de danos oxidativos, 9 peroxidação lipídica como teste TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico), conteúdos de proteína carbonil e espécies reativas de oxigênio. A albumina do plasma e as proteínas totais foram avaliadas por técnica espectrofotométrica utilizando kits comerciais. Os seguintes parâmetros oxidativos também foram medidos nos homogeneizados: glutationa reduzida (GSH), glutationa oxidada (GSSG), conteúdo de enzimas catalase (CAT), glutathione redutase (GR), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx). No segundo trabalho, folhas secas de Rosmarinusofficinalis (alecrim) foram compradas em uma loja de alimentos saudáveis (Maringá, PR, Brasil). Para obter o extrato aquoso, foram suspensos 20 g de folhas de alecrim trituradas em 100 mL de água destilada. A suspensão foi homogeneizada com a ajuda de um agitador magnético. O sobrenadante foi filtrado através de um filtro qualitativo e o filtrado foi liofilizado e armazenado no congelador até o uso. Essencialmente para comparar atividades antioxidantes, as folhas de alecrim também foram extraídas com 70% de etanol empregando o mesmo procedimento descrito para a preparação do extrato aquoso. O extrato aquoso redissolvido foi utilizado para determinar o perfil fenólico por LC-DAD-ESI/MSn (Dionex Ultimate 3000 UPLC, Thermo Scientific, San Jose, CA, EUA. A detecção de MS foi realizada em modo negativo. O mesmo modelo experimental do primeiro artigo foi utilizado no trabalho com o extrato aquoso de alecrim. Os experimentos realizados foram previamente aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da Universidade de Maringá (Protocolo nº 4762290915/ 2015- CEUA-UEM). Os animais foram divididos em 4 grupos de 7 ratos cada. A dose diária foi de 150 mg de extrato por kg de peso corporal. As análises realizadas foram as mesmas do primeiro artigo. RESULTADOS E DISCUSSÃO – O primeiro estudo apresenta evidências experimentais de que os componentes do extrato hidroalcoólico do bagaço de uva Merlot podem atenuar as modificações no estado oxidativo causadas pela artrite. Dos 25 fenólicos identificados no extrato de bagaço de uva, os mais abundantes foram catequina e seus derivados. Vários indicadores de estresse oxidativo em ratos artríticos foram mantidos em seus níveis normais ou perfeitamente normais pelo tratamento de uva no plasma, fígado e cérebro. Uma ação antiinflamatória também foi demonstrada para o extrato de bagaço de uva. Esta conclusão é permitida pelas observações de que o tratamento de ratos artríticos com o extrato hidroalcoólico de bagaço de uva foi capaz de atrasar e diminuir o desenvolvimento do edema da pata em ratos injetados com adjuvante. O atraso no aparecimento de lesões secundárias é um indicador adicional de uma ação antiinflamatória. Além disso, o tratamento com extrato de bagaço de uva também foi capaz de diminuir a infiltração de leucócitos polimorfonucleares (neutrófilos) nas cavidades femoro-tibial das patas. No segundo estudo, doze compostos fenólicos foram identificados e quantificados nos extratos aquosos do alecrim, sendo o ácido rosmarínico o mais abundante. Este segundo estudo acrescenta mais evidências aos efeitos benéficos à saúde do alecrim, neste caso, como uma formulação que exerce efeitos antiinflamatórios e capaz de atenuar o estresse oxidativo causado pela artrite no fígado, cérebro e plasma. Esta atenuação foi provocada pela diminuição do dano oxidativo (por exemplo, menos proteínas carboniladas), melhorando o estado oxidativo (espécies de oxigênio menos reativas) e também aumentando a capacidade antioxidante. A opção por um extrato aquoso foi devido à sua 10 simplicidade e ao fato de que as extrações populares são sempre baseadas na água. CONCLUSÕES - Pelo menos ao nosso conhecimento, este é um dos primeiros estudos a analisar detalhadamente os efeitos de um extrato de bagaço de uva em animais artríticos. Os resultados sugerem uma potencial aplicabilidade do extrato hidroalcoólico de bagaço de uva Merlot na melhoria dos estados oxidativos e inflamatórios em pacientes com artrite. Os resultados obtidos no presente trabalho corroboram e amplificam também a noção geral de que os extratos aquosos de alecrim possuem agentes antiinflamatórios eficientes e sugere que eles são capazes de atenuar o estresse oxidativo inerente à artrite. PALAVRAS CHAVES – atividade antioxidante, atividade anti-inflamatória, extrato de bagaço de uva, alecrim, Rosmarinus officinalis L., artrite

Artigos Publicados Vinculados a Tese:

 https://doi.org/10.1039/C7FO01928A
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2018.07.132